Серо- и генодиагностика

1. Серо- и генодиагностика

СЕРО- И
ГЕНОДИАГНОСТИКА
Рисунки для презентаций
(Ссылка: Internet < 2008 г.)

2.

3. Серодиагностика ( Часть 1. РА, РП, РСК , РН )

СЕРОДИАГНОСТИКА
( ЧАСТЬ 1. РА, РП, РСК , РН )
Рисунки разных
источников интернета

4.

5. Serum - сыворотка

Сыворотка – это свернутая плазма (кровь)
без сгустка.
Антисыворотка (А-Св) – сыворотка,
содержащая специфические антитела
(противодифтерийная сыворотка …).

6. Методы диагностики инфекции

Прямые
(выявления возбудителя)
- Микробиологический
- анализ
- Методы выявления
Ag (антигенов)
- Микроскопия
- Генодиагностика
Косвенные
(выявление эффекта)
- Методы выявления
- антител
- Инструментальный
анализ
- Гистология

7. Получение сыворотки (=Св; Св - это свернутая плазма без сгустка)

Кровь берется в пустую емкость (можно с
шариками; без антикоагулянтов)
Ретракция (= сокращение сгустка) за счет
тромбоспондина тромбоцитов (37о C ~40
минут)
Отслаивается желтая жидкость –
сыворотка (центрифугируем для
отделения от примесей эритроцитов)

8. Пробирка с осевшими эритроцитами (с антикоагулянтом)

9.

10. Получение антисыворотки (= А-Св)

Вводим АГ млекопитающему несколько
раз (с адъювантом)
Через ~месяц берем пробно кровь Св
Проверяем титр АТ
30% крови или 50% ( 50%
смертность) Св +
консервант Использование

11.

12. Адъювант – депо для АГ (для медленного рассасывания).

Неполные (без иммуностимулятора)
Полные (с иммуностимулятором)

13.

14. Очистка антисывороток

Спиртовое осаждение
Высаливание
Аффинная хроматография
…

15. Аффинная хроматография (очистка АТ)

16.

!!!
Для проведения сер.реакций все Св
инактивируются по СК (системе
комплемента) при 52o в течение
20-30 минут.
[При более высокой температуре (56
градусов) идет денатурация Ig .]

17.

Содержание части 1.
РА
РП
РСК

18.

Сравнительная чувствительность
основных иммунометрических методов
Метод
Предел чувствительности
Прямая преципитация в растворе
500 мкг/мл
Радиальная иммунодиффузия (Манчини)
50 мкг/мл
Двойная иммунодиффузия (Оухтерлони)
10 мкг/мл
Контрэлектрофорез
5 мкг/мл
Турбидиметрия и нефелометрия
0,5 мкг/мл
Дот-блот
0, 05 мкг/мл
Иммуноблоттинг
0, 0005 мкг/мл
ИФА, непрямая иммунофлюоресценция
0, 00005 мкг/мл
Хемилюминисценция
0, 000005 мкг/мл
Радиоиммунный метод
0, 0000005 мкг/мл

19. !!!

20. Содержание части 1.

21.

РА
( реакции агглютинации )

22.

РА
(реакции агглютинации;
проводятся с клетками)

23.

24.

http://www.slideshare.net/drjayeshpatidar/clinical-microbiology

25.

SAT
= serum agglutination test
= РА

26. РА ( реакции агглютинации )

27. РА (реакции агглютинации; проводятся с клетками)

.

28.

29.

.

30. SAT = serum agglutination test

Human red blood cells before (left) and after (right)
adding serum containing anti-A antibodies.
The agglutination reaction the presence of the A antigen
on the surface of the cells.

31.

32. .

33.

34.

.

35. Human red blood cells before (left) and after (right) adding serum containing anti-A antibodies. The agglutination reaction the presence of the A antigen on the surface of the cells.

http://books.google.ru/books?id=ytCNCbCWx8oC&pg=PA87&dq=Immunoglob
ulin+variable+region&hl=ru&sa=X&ei=xE9vUbClMqeo4AT2r4DgBw&ved=0CFk
Q6AEwCDgK#v=onepage&q=Immunoglobulin%20variable%20region&f=false

36.

Ориентировочная
РА

37.

IgM - холодовые Ig
(т.е. лучше связывают
АГ «на холоду»)
IgG - тепловые Ig
РА
http://vetfak.nsau.edu.ru/new/uchebnic/microbiology/stu/index_immun.htm

38.

39.

40.

IgM – холодовые АТ
(осаждение ИК в коже)
IgG – тепловые АТ
(осаждение ИК
в почках, легких)

41.

Развернутая
РА
(количественная реакция;
с раститровкой)

42.

Развернутая
РА

43.

44.

45.

46.

47.

РНА
(реакция непрямой
/пассивной/
агглютинации)

48.

Диагностикумы
1) АГ-содержащие
- микробные
- эритроцитарные
(РНГА)
- латексные
2) АТ-содержащие
- микробные
- эритроцитарные
(РПГА)
- латексные

49.

50.

Ла́текс (англ. latex, нем. Latex)
— общее название эмульсий
дисперсных полимерных частиц в
водном растворе.
В природе встречается в виде
молочка, которое выделяют
различные растения, в частности
бразильская гевея, одуванчик и др.

51.

Латексная агглютинация

52.

http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/chap18/

53.

- РНГА
(= с эритроцитарным
диагностикумом)

54. РНА (реакция непрямой /пассивной/ агглютинации)

«Зонтик» - агглютинация есть
Пуговка – агглютинации нет
http://www.slideshare.net/jochoa/18-virus-viroides-y-priones

55. Диагностикумы

Зонтик
= агглютинация
есть
Пуговка

56.

1% суспензия эритроцитов
0,1 мл осадка эритроцитов до 10 мл
физраствора

57. Ла́текс (англ. latex, нем. Latex) 

http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/chap18/

58. Латексная агглютинация

РНГА

59.

Quantitative agglutination
test

60. - РНГА (= с эритроцитарным диагностикумом)

РНГА
(эритроцит
+ АГ)
Определение АТ

61. «Зонтик» - агглютинация есть Пуговка – агглютинации нет

http://www.slideshare.net/drjayeshpatidar/clinical-microbiology

62.

РНГА
(эритроцит + АТ)
Определение АГ

63. 1% суспензия эритроцитов

Термодинамическое
движение

64.

65. РНГА

66. Quantitative agglutination test

Hemagglutination Inhibition

67.

РПГА
http://www.slideshare.net/KAVIPRIYA6/ag-ab-

68.

Реакция коагглютинации
(РКА)
http://vetfak.nsau.edu.ru/new/uchebnic/microbiology/stu/index_immun.htm

69.

Белок А = FcR
Реакция коагглютинация (РКА)
http://vetfak.nsau.edu.ru/new/uchebnic/microbiology/stu/index_immun.htm

70.

71.

РТГА
(реакция торможения
гемагглютинации)

72.

http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/chap18/

73. Hemagglutination Inhibition

РТГА
http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/chap18/

74. РПГА

.

75.

.

76. Реакция коагглютинации (РКА)

http://www.slideshare.net/KAVIPRIYA6/ag-ab-

77. Реакция коагглютинация (РКА)

78.

.

79.

Оценка титра АТ в динамике
зб
1 раз – при поступлении в стационар
(остатки Св замораживаются)
2 раз через дней 10-14 парно
Если титр АТ (= Ig) увеличился в 4 и более
раз, то это свидетельствует о свежей
инфекции.

80.

http://www.slideshare.net/jochoa/18-virus-viroides-y-priones

81. РТГА (реакция торможения гемагглютинации)

82.

Контроли
Для проверки качества реакции
Положительный контроль (+)
Отрицательный контроль (-)

83. РТГА

Реакция Кумбса

84. .

Реакция Кумбса
(= антиглобулиновый тест)

85. .

DAT прямой антиглобулиновый тест !
= Прямой тест Кумбса
Разработан Кумбсом в 1945 году для
дифференцировки иммунного и неиммунного
гемолиза.
Среди здоровых доноров тест положителен в 1
случае на 1000-14.000 и примерно в 1 случае на
6-100 среди госпитализированных пациентов
без очевидных признаков гемолиза или
гемолитической анемии.
https://books.google.ru/books?id=8pBrgAGcoWMC&pg=PA318&dq=AB+Rh+IgG+IgM&hl=ru&sa=X&ved=0
ahUKEwjOw6rfhubJAhXK_HIKHXcDCNQQ6AEIHDAA#v=onepage&q&f=true

86.

Варианты постановки реакции
Кумбса
Непрямая (оценка титра антител)
Прямая

87.

Резус-конфликт
Реакция Кумбса

88. НА есть у вирусов

Прямая РА Кумбса

89.

90. .

91. Оценка титра АТ в динамике зб

92.

Прямая и непрямая проба Кумбса

93.

Реакция флоккуляции
(по Рамону) (от лат . flоecus - хлопья шерсти) появление опалесценции или хлопьевидной массы
(иммунопреципитации) в пробирке при реакции
токсин - антитоксин или анатоксин - антитоксин.
Применяют для определения активности
антитоксической сыворотки или
анатоксина.
http://vetfak.nsau.edu.ru/new/uchebnic/microbiology/stu/index_immun.htm

94. Контроли

Нефелометрия,
турбометрия

95.

Нефелометрия, турбометрия

96.

http://books.google.ru/books?id=EGW5CFOII9IC&pg=PA26&dq=Immunoglobul
in+variable+region&hl=ru&sa=X&ei=xE9vUbClMqeo4AT2r4DgBw&ved=0CEUQ
6AEwBDgK#v=onepage&q=Immunoglobulin%20variable%20region&f=false

97. Реакция Кумбса (= антиглобулиновый тест)

РП
(реакции преципитации
/поиск молекул/)

98. DAT -

Реакция кольцепреципитации
(в жидкой фазе) по Асколи
(диагностика сибирской язвы)

99. Варианты постановки реакции Кумбса

Реакция кольцепреципитации
в жидкой фазе

100.

101. Прямая РА Кумбса

http://books.google.ru/books?id=L4CIqkhuQ8C&pg=PA170&dq=Immunoglobulin+variable+region&hl=ru&sa=X&ei=x
E9vUbClMqeo4AT2r4DgBw&ved=0CF8Q6AEwCTgK#v=onepage&q=Immunog
lobulin%20variable%20region&f=false

102.

103.

104.

РП по Оухтерлони
(в 1% агарозе
АГ
/плотной фазе/)
АТ

105. Прямая и непрямая проба Кумбса

http://www.slideshare.net/drjayeshpatidar/clinical-microbiology

106.

107.

108.

109.

http://books.google.ru/books?id=iuBiMLiHyjcC&pg=PA375&dq=cd88++immune+complex&hl=ru&sa=X&ei=8
z5TT-GyL8PItAarwqWXDA&ved=0CC4Q6AEwADgU#v=onepage&q&f=false

110.

http://books.google.ru/books?id=EGW5CFOII9IC&pg=PA26&dq=Immunoglobul
in+variable+region&hl=ru&sa=X&ei=xE9vUbClMqeo4AT2r4DgBw&ved=0CEUQ
6AEwBDgK#v=onepage&q=Immunoglobulin%20variable%20region&f=false

111. Нефелометрия, турбометрия

112. Нефелометрия, турбометрия

.

113.

114.

115. РП (реакции преципитации /поиск молекул/)

116.

117. Реакция кольцепреципитации в жидкой фазе

.

118.

http://books.google.ru/books?id=ytCNCbCWx8oC&pg=PA87&dq=Immunoglob
ulin+variable+region&hl=ru&sa=X&ei=xE9vUbClMqeo4AT2r4DgBw&ved=0CFk
Q6AEwCDgK#v=onepage&q=Immunoglobulin%20variable%20region&f=false

119.

120.

121.

122.

http://books.google.ru/books?id=3PJVLH1NmQAC&pg=PA212&dq=Immunoglo
bulin+variable+region&hl=ru&sa=X&ei=xE9vUbClMqeo4AT2r4DgBw&ved=0CD

123.

РП
по
Оухтерлони

124.

125.

РП по Манчини
(в агарозе /плотной фазе/)
Реакция количественная

126.

Стандартная Св - это Св с
точно определенным
количеством искомого АГ.
Титруем.

127.

http://vetfak.nsau.edu.ru/new/uchebnic/microbiology/stu/index_immun.htm

128.

129.

http://books.google.ru/books?id=iuBiMLiHyjcC&pg=PA375&dq=cd88++immune+complex&hl=ru&sa=X&ei=8
z5TT-GyL8PItAarwqWXDA&ved=0CC4Q6AEwADgU#v=onepage&q&f=false

130. .

http://books.google.ru/books?id=EGW5CFOII9IC&pg=PA26&dq=Immunoglobul
in+variable+region&hl=ru&sa=X&ei=xE9vUbClMqeo4AT2r4DgBw&ved=0CEUQ
6AEwBDgK#v=onepage&q=Immunoglobulin%20variable%20region&f=false

131.

Радиальная иммунодиффузия

132.

.

133.

http://www.slideshare.net/drjayeshpatidar/clinical-microbiology

134.

Ракетный электрофорез
(модификация РП по Манчини)

135. .

https://books.google.ru/books?id=j-qeCgAAQBAJ&printsec=frontcover&dq=inauthor:"Patrick+R.+Murray"&hl=ru&sa=X&ved=0ahUKEwjmmIHxiIjKAhVC1XIKHRbOA-

136.

Реакция
иммунопреципитации

137.

138.

https://books.google.ru/books?id=MXMazr0LRDsC&printsec=frontcover&dq=microbiology&hl=ru&sa=X&ved=0ahUKEwiC
w63qhojKAhVEvHIKHb-bAQ8Q6AEINDAD#v=onepage&q=microbiology&f=true

139.

.

140.

http://books.google.ru/books?id=tbgBneqKu6MC&pg=PA144&dq=IgG1+IgG2+IgG
3+IgG4+Ig+g+IgG&hl=ru&sa=X&ei=FVh6UefVLen44QT_kID4CA&ved=0CGUQ6AEw
CQ#v=onepage&q=IgG1%20IgG2%20IgG3%20IgG4%20Ig%20g%20IgG&f=false

141. РП по Оухтерлони

http://vetfak.nsau.edu.ru/new/uchebnic/microbiology/stu/index_immun.htm

142.

143.

https://books.google.ru/books?id=XRZGZfJf7fgC&pg=PA279&dq=enterobacteriaceae&hl=ru&sa=X&ei=X5YgVYbFDYHRsgHFyIKwCQ&ved=0CDUQ6AEwBDgK#v=onepage&q=enterobacteriaceae&f=true

144.

145. Стандартная Св - это Св с точно определенным количеством искомого АГ. Титруем.

146.

147.

148.

?
?

149.

150. Радиальная иммунодиффузия

https://books.google.ru/books?id=MXMazr0LRDsC&printsec=frontcover&dq=microbiology&hl=ru&sa=X&ved=0ahUKEwiC
w63qhojKAhVEvHIKHb-bAQ8Q6AEINDAD#v=onepage&q=microbiology&f=true

151. .

РСК
(реакция связывания
комплемента)

152.

153. Ракетный электрофорез (модификация РП по Манчини)

154.

РСК
(реакция отрицательная)
ЕА =
гемолитическая
система

155.

РСК
(реакция положительная)

156. Реакция иммунопреципитации

157.

РН
(реакции нейтрализации)

158.

РН (реакция нейтрализации)
токсина антитоксическими
антителами
http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/chap18/

159. .

Диагностика ботулизма
7 серотипов ботулинического токсина
(А-G).
В РФ 4 серотипа токсина – А, В, С, Е.
4 мышки
Вводим токсинсодержащий
материал, затем антисыворотки.

160.

Ботулизм
(9 серотипов ботулинического
токсина – А-G; С1, С2, С3;
в РФ – А, В, С, E)

161.

Чипы

162.

http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/chap19/sld004.ht

163.

http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/chap19/sld004.ht

164.

165.

Благодарю за внимание!

166.

+ …