Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции

1.

Лабораторная диагностика ВИЧ- инфекции
Текст слайда
Хабибуллина Гузель Ильсоновна Заведующая серологической лаборатории
ГАУЗ « РЦПБ СПИД и инфекционных заболеваний» МЗ РТ

2.

Задачи лаборатороной диагностики В И Ч
Определить ВИЧ статус (да/нет)
Исследования у ВИЧ-позитивного пациента :
• Определить стадии ВИЧ-инфекции и прогноз течения;
• Сформулировать показания к терапии;
• Проводить контроль эффективности терапии.
2

3.

Последовательность
появлен ие маркеров В ИЧ -инфекции
Продолжительность стадий ВИЧ -инфекциипри отсутствии АРВТ
3

4.

Методы л аборат орной диагн ост и ки
Выявление
компонентов вируса
Выявление антител к
вирусу
Ранний антиген
ВИЧ
р24
Нуклеиновые кислоты
ВИЧ-ДНК,РНК
4

5.

Методы лабораторной диагностики
Стандартный метод
Комбинированные
тест-системы ИФА,
ИХЛА (ранний
антиген ВИЧ р24 + АТ)
Подтверждающие
тесты – ИБ
Экспресс-методы
(Быстрые тесты)
Слюна –
выявление АТ к ВИЧ
Текст слайда
Кровь
•выявление АТ
•Выявление АТ + АГ
Дополнительные методы:
Выявление ДНК ВИЧ
Выявление РНК
ВИЧ (вирусная
нагрузка)
Моча –
выявление АТ к ВИЧ
5

6.

6

7.

И ммунофермент ны й ан ализ
Использование тест- систем 4
поколения позволяет одновременно
определять как антитела к ВИЧ 1- го и 2го типа, так и антигены (р 24).
1 этап – скрининговый :
ИФА1 – скрининг Набор 1;
ИФА2 (в дубле) Набор 1;
ИФА ВИЧ-АГ+АТ реакция отрицательная;
ИФА ВИЧ-АГ+АТ реакция положительная.
2 этап – референтный
3 этап – экспертный
7

8.

Алгоритм референс тестирования на
ВИЧ
В соответствии с Санитарно-эпидемиологическими правилами
СП 3.1.5.2826-10 Профилактика ВИЧ-инфекции.
п.4.4.Диагностический алгоритм тестирования
Тест-система 1
Тест-система 2
при отриц. рез-те
+
результат на ВИЧ
отрицательный
+
ИБ
Для подтверждения АТ
+
сомнительный
Проба содержит
антитела к ВИЧ
-
Тест-система 3
(для определения р24)
Диспансерный учет
Повторный забор крови
через 2,4,6…недель
+
-

9.

9

10.

10

11.

Референс тестирование (Тест-система1) на
примере ВИЧ Комбо АГ/АТ
•Тест-система использует принцип
хемилюминисцентного иммуноанализа на
парамагнитных частицах.
•Обеспечивает исключительную
чувствительность ко всем известным
субтипам
вирусов ВИЧ-1 и ВИЧ-2.
•Обеспечивает раннее выявление
инфекций ВИЧ со средней
чувствительностью
к ВИЧ-1 антигену p24 18,06 пг/мл.
•Высокая специфичность, подтвержденная
тестированием донорской крови.
•Обеспечивает высокую
производительность и автоматизацию с
выдачей достоверных результатов в
течение 29 минут.
Автоматический иммунохимический
анализатор - Arсhitect plus i2000sr

12.

Референс тестирование
(Тест-система 2)
на примере ДЖЕНСКРИН ВИЧ 1-2 АГ/АТ УЛЬТРА.
Лучшая чувствительность по
антителам
Лучшая выявляемость
субтипов и вариантов
вирусов.
Специфичность на
случайной выборке доноров
(6038) 99,95%
Чувствительность по
антигену р24 ниже 25 пг/мл

13.

ДС-ИФА-ВИЧ-АГ-СКРИН
(Тест-система 3)
• Ранее выявление ВИЧ-1 Антигена
• Аналитическая чувствительность по p24 антигену –
0,5пг/мл
• Антиген р24 в сыворотке в норме отсутствует.
• Антиген р24 - белок стенки нуклеотида ВИЧ.
следствие начала репликативного процесса.
• Антиген р24 появляется в крови через 2 нед
после инфицирования и может быть выявлен в
период от 2 до 8 нед.

14.

14

15.

CТ Р ОЕ Н ИЕ В ИЧ -1
Обозначение
Геном
Природа
Gp 160
ENV
Гликопротеин
предшественник Gp 120
и Gp41
Gp 120
ENV
Гликопротеин оболочки
P 68/66
POL
Обратная транскриптаза
Р55
GAG
Предшественник
ядерных белков
Р52/51
POL
Обратная транскриптаза
Gp 41
ENV
Трансмембранный гликопроте
ин
Р 40
GAG
Предшественник
ядерных белков
Р 34/31
POL
эндонуклеаза
Р 24/25
GAG
Ядерный белок
Р18/17
GAG
Ядерный белок
15

16.

Результаты тестирования крови методом
иммуноблотинга (ИБ)
ИБ положительный
Автоблот – прибор для
постановки реакции
ИБ сомнительный
ИБ отрицательный

17.

Области применения к экспресс тестам
Области применения простых/быстрых тестов:
• транспслантология - перед забором донорского материала;
• донорство - обследование крови в случае экстренного переливания препаратов крови и отсутствия
обследованной на антитела к ВИЧ донорской крови;
• вертикальная профилактика - тестирование беременных женщин с неизвестным ВИЧ-статусом в
предродовом периоде (для назначения медикаментозной профилактики ВИЧ-инфекции в родах);
• постконтактная профилактика ВИЧ - тестирование на ВИЧ в случае аварийной ситуации.
Каждое исследование на ВИЧ с применением простых/быстрых тестов должно сопровождаться обязательным
параллельным исследованием той же порции крови классическими методами ИФА, ИБ. 4.9. Выдача
заключения о наличии или отсутствии ВИЧ-инфекции только по результатам простого/быстрого теста не
допускается. Результаты простых/быстрых тестов используются только для своевременного принятия решений
в экстренных ситуациях
17

18.

19.

Интерпретация результатов
чувствительность 99,9%,
специфичность 99,6%,
«-» тест = здоров,
«+» тест => в ИФА и ИБ
Выдача заключения о наличии или отсутствии ВИЧ-инфекции только по результатам простого/быстрого теста
не допускается.
19

20.

Два очень важных показателя, которые
необходимы всем людям с ВИЧ — ИС и ВН
Клиника СПИДа
CD4 (иммунный статус) –
это «расстояние,
оставшееся до пропасти»
= констатация стадии ВН
(вирусная нагрузка) – это
скорость, с которой
движется поезд = прогно
основное показание к АРВТ
Уровень CD-4
Констатация имеющейся
иммуносупрессии
Вирусная нагруска
прогноз
при высокой ВН вероятно в
ближайшем будущем снизятся
CD4 и появится симптомы
вторичных заболеваний
ориентируемся при отсутствии
клиники (не всегда существует
корреляция клиники и CD4 ! –
часто возможно в т.ч. появление
клинической симптоматики при
нормальных/ некритично
сниженных CD4 и наоборот)

21.

Зачем нужно определение CD-4 клеток?
¨ установление степени иммунных нарушений
¨ для определения показаний для профилактического лечения оппортунисто
¨ слежение за иммунологическим ответом на АРВТ (восстановление CD4 при лечении)
Степени иммунных нарушений
отсутствие иммунодефицита
или незначительный
умеренный иммунодефицит
выраженный иммунодефицит
тяжелый иммунодефицит
CD4, клеток/мкл
≥ 6 лет и взрослые
> 500
350-499
200-349
< 200
21

22.

Цитофлуориметрическое определение количества CD-4 клеток
-проточный цитофлоуриметр позволяет определить абсолютное количество Т-хелперов( СД4/СД3, СД8/СД3)
-реагенты содержат меченный флуорохромами антитела, которые специфически связываются с поверхностными
антигенами лимфоцитов.
В приборе клетки попадают в лазерный пучек, который вызывает флуоресценцию клеток, связавший
флуоресцентные метки.
22

23.

Кодирование при обследовании на ВИЧ
101-обследованные добровольно при прохождении диспансеризации ;
102- больные наркоманией и токсикоманией;
103-мужчины,имеющие секс с мужчинами;
104-больные с подозрением или подтвержденным диагнозом ЗППП;
105-лица,занимающиеся оказанием ком. секс услуг, проституцией (КСР);
109-беременные;
110-мужья,половые партнеры беременных;
112-лица,поступающиеся в ИВС, приемники-распределители;
114-лица,обследуемые по клиническим показаниям;
116-обследование при обращении за медицинской помощью;
117-лица,с подозрением или с подтверженным диагнозом гепатита В или С;
121-контактные лица, выявленные при проведении эпид. расследования;
122-дети и подростки обследуемые в очагах;
124-дети, рожденные ВИЧ-инфицированными матерями;
125- участники аварийной ситуации, с попаданием крови, биологических жидкостей под кожу, на
кожу или слизистые;
126-опекуны и опекаемые с круглосуточным прибыванием детей(домов ребенка, школ- интернатов);
131-реципиенты крови и ее компанентов;
132-медицинские работники;
133-биоматериал при экспертизе трупов, умерших от инфекционных заболеваний.
23

24.

Обязательному медицинскому освидетельствованию на ВИЧ-инфекцию подлежат
108(а,б)
Доноры крови, плазмы крови, спермы и других биологических жидкостей, тканей и органов, а также
беременные в случае забора абортной и плацентарной крови для производства биологических
препаратов
Врачи, средний и младший медицинский персонал центров по профилактике и борьбе со СПИДом,
медицинских организаций, специализированных отделений и структурных подразделений медицинских
организаций, занятые непосредственным обследованием, диагностикой, лечением, обслуживанием, а также
проведением судебно-медицинской экспертизы и другой работы с лицами, инфицированными вирусом
иммунодефицита человека, имеющие с ними непосредственный контакт
115
Врачи, средний и младший медицинский персонал лабораторий, которые осуществляют обследование
населения на ВИЧ-инфекцию и исследование крови и биологических материалов, полученных от лиц,
инфицированных вирусом иммунодефицита человека
Научные работники, специалисты, служащие и рабочие научно-исследовательских учреждений, предприятий
(производств) по изготовлению медицинских иммунобиологических препаратов и других организаций, работа
которых связана с материалами, содержащими вирус иммунодефицита человека
126.2.б
Лица, проходящие военную службу, поступающие в военные учебные заведения, а также на военную службу
по призыву и контракту
132(а,б)
Медицинские работники в стационарах (отделениях) хирургического профиля при поступлении на работу и
персонал других медицинских организаций, обследование которых на ВИЧ-инфекцию регламентировано
нормативно-правовыми актами Минздрава России
200
Иностранные граждане и лица без гражданства
24

25.

Задачи и этапы до-тестового консультирования
Этапы
ВВОДНЫЙ
Задачи
• Представление
• Конфиденциальность
Получение и оценка информации
• Факторы риска у пациента
• Оценка
возможностей
пациента
• Оценка знаний пациента
Предоставление информации
• О ВИЧ-инфекции
• О предстоящем обследовании
Обсуждение вероятных последствий
Тестирования
Получение информированного
Согласия
25

26.

Задачи после-тестового консультирования
Отрицательный результат
• Изменение поведения на безопасное в отношении ВИЧинфекции
• Период «окна» и повторное обследование
Положительный результат
• Гарантии оказания мед.помощи, лечения, соблюдение прав и свобод
- Рекомендации по дальнейшей тактике
26

27.

Текст слайда